熒光素鉀鹽使用說(shuō)明:
D-熒光素鉀鹽（K+）設(shè)計(jì)用于體外和體內(nèi)生物發(fā)光測(cè)定。D-熒光素鉀鹽一般為黃綠色，激發(fā)波長(zhǎng)為494nm，發(fā)射波長(zhǎng)為521nm。D-熒光素的質(zhì)量和純度對(duì)于獲得良好和可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。BIOFOUNT可提供高質(zhì)量的無(wú)內(nèi)毒素D-熒光素K+鹽

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二、D-熒光素鉀鹽的使用方法:

1. 溶液的制備
D-熒光素鉀鹽的溶液可以用于染色、標(biāo)記、檢測(cè)等多種應(yīng)用。
制備D-熒光素鉀鹽溶液的方法：
a.首先稱取適量的D-熒光素鉀鹽，加入適量的去離子水中后進(jìn)行均勻攪拌；
b.使用過(guò)濾膜將溶液過(guò)濾，除菌。
c.將D-熒光素鉀鹽溶液調(diào)節(jié)至所需要的濃度。

2. 染色實(shí)驗(yàn)過(guò)程
D-熒光素鉀鹽可以用于細(xì)胞染色、組織染色等染色實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
a.首先將細(xì)胞或組織樣本固定在載玻片上。
b.然后加入適量的D-熒光素鉀鹽溶液，使試劑溶液可以覆蓋樣本。
c.在黑暗條件下可以孵育一段時(shí)間，使D-熒光素鉀鹽充分滲透入細(xì)胞或組織中。
d.使用PBS緩沖液洗滌樣本，去除多余的D-熒光素鉀鹽。
e.在顯微鏡下觀察樣本，觀察樣品的熒光信號(hào)。

3. 實(shí)驗(yàn)標(biāo)記
D-熒光素鉀鹽也可以用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、核酸等生物分子。
實(shí)驗(yàn)標(biāo)記方法：
a.首先將蛋白質(zhì)或核酸與d-熒光素鉀鹽共同孵育。
b.再用凝膠電泳等方法分離標(biāo)記后的生物分子。
c.最后在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記后的生物分子即可。

4. 檢測(cè)方法
D-熒光素鉀鹽可用于檢測(cè)生物分子的存在和濃度。
D-熒光素鉀鹽檢測(cè)方法：
a.將d-熒光素鉀鹽與待檢測(cè)的生物分子進(jìn)行共同孵育。
b.用凝膠電泳等方法分離孵育后的混合物。
c.在熒光顯微鏡下觀察熒光信號(hào)，即可判斷生物分子的存在和濃度。

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1.說(shuō)明
1.1.簡(jiǎn)介及特點(diǎn)
祝賀您購(gòu)買(mǎi)了BIOFOUNT的D-熒光素鉀鹽產(chǎn)品！
D-熒光素，鉀鹽是一種合成螢火蟲(chóng)熒光素。這種高純度、無(wú)內(nèi)毒素的產(chǎn)品
非常適合體外和體內(nèi)生物發(fā)光測(cè)定。高質(zhì)量的基板消除了可能由于內(nèi)毒素的存在而干擾測(cè)定。中性條件下的正確包裝確保了產(chǎn)品的完整性和穩(wěn)定性。這種螢光素酶的水溶性基質(zhì)是現(xiàn)成的，易于使用。
主要特點(diǎn)有：
•高純度>99.5%
•溶解性好，靈敏度高
•用于生物發(fā)光測(cè)定的可靠體內(nèi)報(bào)告基因
•不含內(nèi)毒素（非常適合體內(nèi)應(yīng)用）
•適用于體外實(shí)驗(yàn)
•易于使用
•在整個(gè)動(dòng)物體內(nèi)快速和更容易分布

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-熒光素，鉀鹽：
−化學(xué)名稱：4,5-二氫-2-（6-羥基-2-苯并噻唑基）-4-噻唑羧酸鉀鹽
−分子式：C11H7N2O3S2K
−分子量：318.42 g/mol
−CAS編號(hào)：115144-35-9
−分子結(jié)構(gòu)：
−分子生物學(xué)等級(jí)和高級(jí)純度：99.7%純度。通過(guò)九個(gè)獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證質(zhì)量包括HPLC和FTIR。

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1.2穩(wěn)定性和儲(chǔ)存
※ D-熒光素對(duì)光、氧氣和水分敏感，呈粉末狀和溶液狀。
※ 儲(chǔ)存（粉末）收到并長(zhǎng)期使用后，將粉末儲(chǔ)存在密閉的干燥容器，-20°C。D-熒光素在-20℃下至少穩(wěn)定一年干燥和中性氣體條件。
※ 如果裝有D-熒光素粉末的瓶子必須反復(fù)打開(kāi)和關(guān)閉，建議用惰性物質(zhì)填充小瓶氣體（氬氣或氮?dú)猓?br /> ※ 儲(chǔ)存（溶液）D-熒光素儲(chǔ)備溶液可以在水中或D-PBS中制備，然后在-20°C下冷凍或優(yōu)選在-80°C下。D-熒光素溶液的穩(wěn)定性是相當(dāng)有爭(zhēng)議的
※ 解決方案:盡管存在以上問(wèn)題，冷凍的D-熒光素溶液（-80°C）仍然適合使用，D-熒光素是在低pH（＜6.5）和高pH（＞7.5）下相當(dāng)不穩(wěn)定。為了避免重復(fù)的冷凍和解凍循環(huán)，我們建議用小管等分D-Luciferin溶液，并將其儲(chǔ)存在-80°C下。

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2.應(yīng)用
※ 活細(xì)胞、組織和動(dòng)物模型中的生物發(fā)光測(cè)定
※ 螢光素酶報(bào)告基因測(cè)定
※ 全動(dòng)物成像（體內(nèi)和體外基因測(cè)定）
※ 熒光素酶基因實(shí)驗(yàn)
※ ATP測(cè)定（螢光素酶催化ATP轉(zhuǎn)化為AMP）和免疫測(cè)定
※ 焦磷酸測(cè)序
※用于序列基因分析實(shí)驗(yàn)

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3. 以下是D-熒光素鉀鹽可以快速實(shí)現(xiàn)非常高的生物發(fā)光信號(hào)的使用指南。最佳使用條件因：動(dòng)物、細(xì)胞培養(yǎng)、給藥途徑以及測(cè)定靈敏度而異。D-熒光素的最終含量可能需要調(diào)整才能達(dá)到最佳效果。

3.1用于體內(nèi)測(cè)定的D-熒光素的制備
D-熒光素在整個(gè)動(dòng)物體內(nèi)的生物分布是快速且比較容易，但動(dòng)力學(xué)可能依賴于組織。D-熒光素能穿透細(xì)胞膜，并能通過(guò)血腦屏障、血胎盤(pán)屏障和血睪丸屏障。
材料:
•D-熒光素，鉀鹽
•D-PBS（不含Mg2+和Ca2+）
•注射器過(guò)濾器0.2µM

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每次試驗(yàn)最好是重新配制每個(gè)實(shí)驗(yàn)所需的D-熒光素鉀鹽的量。然而，凍結(jié)的庫(kù)存也可以使用熒光素溶液（參見(jiàn)上面的儲(chǔ)存和穩(wěn)定性部分）。
1.將D-熒光素溶解在D-PBS中以獲得15或30mg/mL的最終濃度。
2.通過(guò)0.2µM過(guò)濾器進(jìn)行殺菌（可選，不需要）。
3.在用10µL/g的身體對(duì)每只動(dòng)物成像前5至15分鐘腹膜內(nèi)或靜脈注射
體重或150至300µg/g體重。為了有足夠甚至過(guò)量的基質(zhì)，我們建議每只小鼠使用3mg D-熒光素（30mg/mL中的100µL）。